Ensaios baseados em repórteres
Os ensaios baseados em repórteres são ensaios biológicos utilizados para medir a capacidade reguladora de uma sequência de ADN desconhecida, estudar a regulação de genes por factores de ação cis ou trans, ou medir a ativação de vias de sinalização celular.
Nestes ensaios, a sequência promotora desconhecida está ligada a um gene repórter facilmente detetável, cujo produto pode ser facilmente detectado e medido de forma quantificável. Os níveis de expressão do gene repórter são monitorizados através da quantificação da atividade enzimática da proteína repórter, que é utilizada para caraterizar sequências reguladoras, atividade de factores de transcrição, sinalização celular ou vias de sinalização.
Os genes repórter mais comuns incluem a beta-galactosidase, a luciferase, a beta-lactamase, a fosfatase alcalina e a GFP (proteína de fluorescência verde).
As luciferases são utilizadas para criar ensaios bioluminescentes que são altamente quantitativos, sensíveis numa vasta gama dinâmica e facilmente detectados através da medição da emissão de luz.
A maioria dos ensaios de genes repórteres envolve um ou dois genes repórteres, com o segundo repórter expresso a partir de um vetor de "controlo" para normalizar os resultados do repórter experimental.
O gene repórter de controlo é normalmente conduzido por um promotor constitutivo, e o vetor de controlo é co-transfectado com o repórter experimental.
As células são expostas a diferentes factores ou condições, cujo efeito pode ser facilmente monitorizado através da medição das alterações na emissão de luz. São utilizados vários métodos de deteção, como a luminescência, a absorvância e a fluorescência, para medir a expressão da proteína do gene repórter.
Os ensaios com genes repórter podem também ser utilizados para avaliar quantitativamente a atividade de RNAi e identificar moduladores de RNAi. Podem também ser utilizados para analisar produtos químicos que perturbam a sinalização androgénica.
As células repórteres utilizam transfecção transiente para garantir resultados fiáveis e precisos, e as células são optimizadas para fornecer as melhores condições experimentais com os reagentes fornecidos nos kits, permitindo uma fácil padronização das experiências.
Os kits de ensaio baseados em células repórter oferecem uma sensibilidade de ensaio e uma gama dinâmica óptimas ao quantificar a atividade dos receptores, tornando-os um serviço de rastreio fiável e rentável para compostos farmacêuticos, produtos químicos ou amostras ambientais.
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