Métodos de extração de ácidos nucleicos são essenciais para a biologia molecular e são comumente usados em muitas aplicações médicas e biológicas. A extração de ácidos nucleicos pode ser dividida em 3 etapas, que podem ser otimizadas de acordo com o tipo de amostra e as aplicações subsequentes para as quais os ácidos nucleicos serão usados. Essas etapas são as seguintes:
- Ruptura de estruturas celulares e teciduais
- Remoção de proteínas, lipídios e outros contaminantes dos ácidos nucleicos
- Transferência dos ácidos nucleicos para água ou uma solução tampão que os preserva sem interferir no trabalho subsequente.
Tipos de Métodos de Extração
Os métodos de extração de ácidos nucleicos podem ser classificados em dois tipos diferentes:
- Métodos baseados em solução (como o método fenol-cloroformo)
- Métodos baseados na fase sólida (como esferas magnéticas ou colunas de centrifugação)
Os métodos de extração baseados na fase sólida funcionam fazendo com que os ácidos nucleicos se liguem a suportes sólidos, como esferas magnéticas revestidas de sílica ou outros materiais. As esferas (ou outros suportes) são então lavadas com álcool para remover contaminantes. O suporte é então lavado com um líquido que torna os ácidos nucleicos novamente solúveis, liberando o DNA do suporte em um processo conhecido como eluição. Um método simples é adicionar uma solução contendo um caótropo ao extrato bruto de ácidos nucleicos. Os agentes caotrópicos são moléculas que interrompem a rede de ligações de hidrogênio entre as moléculas de água. Na presença de caótropos, os ácidos nucleicos são muito menos solúveis e se ligam a esferas magnéticas revestidas com vidro, sílica e outros suportes sólidos – permitindo que sejam facilmente separados de contaminantes. Os métodos de extração baseados na fase sólida também podem depender da ligação seletiva de DNA e RNA a resinas de troca iônica ou outros produtos químicos.
