A coloração Oil Red O baseia-se na utilização de um lisocromo (corante lipossolúvel) e um corante azo utilizado para a visualização de triglicéridos neutros e secções de tecido lipídico.

O Oil Red O é um dos corantes Sudanês como Sudan III, Sudan IV e Sudan Black B. No entanto, o Oil Red O substituiu gradualmente as manchas Sudan III e Sudan IV porque a coloração vermelha produzida pelo Oil Red O é muito mais intensa, o que facilita a visualização.

A mancha Oil Red O é feita em amostras frescas ou congeladas. Os tecidos incluídos na parafina não são compatíveis com esta coloração porque a preparação de cortes e especialmente a utilização de solventes eliminam os lípidos.

A coloração Oil Red O baseia-se na utilização de 4 reagentes para a coloração de células gordas de acordo com o método de Johnson.