Protokoll für die Kultivierung und das Screening in Platten für Säugetier- und Insektenzellen
As placas representam uma secção transversal de placas para diferentes tipos de testes, crescimento celular e armazenamento. Oferecemos vários formatos: 96 e 24 poços para satisfazer as suas necessidades.
Protocolo para o rastreio de células de mamíferos e insectos - placas de 96 poços :
Material :
Método :
1. Manter os stocks de células em meio de crescimento apropriado. Dividir as culturas no dia anterior à transfecção a uma densidade apropriada para assegurar o crescimento em fase de registo no momento da transfecção.
2. Aplicar 500 ul / poço de suspensão celular. A densidade de sementeira óptima depende da linha celular, por favor utilizar a densidade recomendada para a linha celular utilizada.
3. Transfectar células de acordo com o protocolo de transfecção estabelecido. Estabelecer a proporção de reagente de transfecção / ADN / nutrientes do que é utilizado para culturas de maior escala.
4. Selar as placas com coberturas ou juntas de plástico e transferi-las para um agitador durante a noite a 800 rpm e 37°C.
5. Colher as células no momento estabelecido para culturas de maior escala. Células pellet por centrifugação a 2500g durante 20 min a 4°C.
6. Reservar o meio de cultura ou pelota para a aplicação e processo a jusante.
Notas :
- O factor mais crítico para a viabilidade celular é a aeração. Serão obtidos resultados óptimos utilizando agitadores com diâmetros orbitais de 3 mm. Não recomendamos trabalhar em placas de 96 poços utilizando agitadores com diâmetros padrão de 25 mm.
- As placas filtrantes Thomson são um excelente produto complementar para aplicações de purificação a jusante.
Sugestão de centrifugação máxima: 3000 g.
Protocolo para o rastreio de células de mamíferos e insectos - placas de 24 poços :
Material :
Método :
1. Manter os stocks de células em meio de crescimento apropriado. Dividir as culturas no dia anterior à transfecção a uma densidade apropriada para assegurar o crescimento em fase de registo no momento da transfecção.
2. Adicionar 4-5 ml / poço de suspensão celular. A densidade de sementeira óptima depende da linha celular, por favor utilizar a densidade recomendada para a linha celular utilizada.
3. Transfectar células de acordo com o protocolo de transfecção estabelecido. Estabelecer a proporção de reagente de transfecção / ADN / nutrientes do que é utilizado para culturas de maior escala.
4. Selar as placas com tampas ou juntas de plástico e transferi-las para um agitador durante a noite a 800 rpm e 37°C.
5. Células de colheita no momento estabelecido para culturas de maior escala. Células de pelotização por centrifugação a 2500 g durante 20 min a 4°C.
6. Reservar o meio de cultura ou pelota para a aplicação e processo a jusante.
Notas :
- O factor mais crítico para a viabilidade celular é a aeração. Serão obtidos resultados óptimos utilizando agitadores com diâmetros orbitais de 3 mm. Não recomendamos trabalhar em placas de 96 poços utilizando agitadores com diâmetros padrão de 25 mm.
- As placas de filtração Thomson são um excelente produto complementar para aplicações de purificação a jusante.